3B Scientific Experiment Set - On the Trail of Flavour Enhancers Brand new and topical-versatile in classroom situations - Manual (Page 34)

®
34
Português
V. Experiência
Preparação da amostra
Pese 3 g da amostra e coloque-a no Erlenmeyer. Misture com 5 ml da solução de extração e moa no alfo-
fariz. Se não houver um almofariz disponível que seja suficientemente grande, a amostra pode ser pro-
cessada porção a porção. Filtre a essência por papel de filtro. O que foi filtrado deve ser usado para a fina
camada para cromatografia.
Se quiser fazer a fina camada de cromatografia mais tarde pode armazenar o que foi filtrado no congela-
dor a -18° C por várias semanas.
Fina camada de cromatografia
Nota: Por favor não toque na folha de cromatografia com os dedos. Use uma pinça e toque apenas na
ponta da folha apenas para transporte. Por favor use luvas sem talco e toque na folha apenas nas extre-
midades. Também a régua que será precisa para mais alguns procedimentos experimentais, deve estar
absolutamente limpa!
Primeiro,com um lápis, desenhe um linha horizontal fina a 1.5 cm do fundo da folha de cromatografia(ver
Fig.1). Esta é a linha de partida para as amostras e para o ácido glutâmico de controle (padrão). Por baixo
desta linha, com uma distância de 8mm entre eles, marque os números 1,2,3 etc. da esquerda para a
direita onde os traços irão correr. Parte do ácido glutâmico padrão (1 mg/ml) mencionado acima deve ser
diluido 1:3 e 1:5 com H
2
O, para que os 3 ácidos glutâmicos de controle tenham as seguintes concentrações
: 1mg/ml, 0.33 mg/ml e 0.2 mg/ml. Deve encher a câmara de cromatografia com a mistura de solventes até
cerca de 7 mm e feche-a com a tampa. Para a saturação da câmara, deve ser incubada pelo menos 15 min.
Usando os tubos capilares e ambas as amostras a analisar, e também as amostras de controle (10 µl cada)
na linha de partida com uma distância igual entre elas (acima dos números). Para cada amostra e amostras
controle, deverá ser usado um novo tubo capilar.
Para aplicação coloque a folha de cromatografia na horizontal na mesa. Depois da aplicação abra a câmara
de cromatografia e coloque a folha de cromatográfica, com as correspondentes amostras a analisar e de
controle, colocando-as com a linha de partida a apontar para baixo no interior da câmara. Volte a fechar
com a tampa.
Agora a mistura de solventes sobe na folha de cromatografia. Quando o solvente subir cerca de 7 cm
(medido apartir da linha de partida), remova a folha da câmara e coloque-a na mesa para secar. O processo
de secagem pode ser acelerado com um secador de cabelos ajustada para baixa potência ou usando um
forno. Contudo, a secagem lenta à temperatura ambiente também é possível.
A seguir, a cromatografia poderá ser colorida. Mas antes de o fazer, é possível guardar a cromatografia num
frigorifico por uns dias, desde que protegido da luz.
Manchas de Aminoácidos
Nota: O recipente tem de estar absolutamente limpa (sem impressões digitais, etc.) pois qualquer proteína
pode contaminar as amostras e formar uma mancha indesejada!
Verta um pouco de solução de ninidrina para manchar no recipiente mais conveniente (vidro ou plástico).
Depois passe a folha de cromatografia pela solução para colorir muito rapidamente (1sec) e deixe a folha
secar no ar ou no forno a cerca de 105ºC. Agora a cromatografia está pronta para análise.
O cromatograma de manchas pode ser guardado à temperatura ambiente no escuro. Colocá-lo no livro de
trabalho deve ser feito com fita adesiva.
Localizar aditivos alimentares