Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 51)

È necessario utilizzare il software Opticon Monitor™ (versione 3.3 o
superiore) oppure il CFX Manager™ software Industrial Diagnostic Edition
per un'interpretazione automatizzata e quantitativa. Sarà possibile stampare
una relazione completa (Cfr. istruzioni del software).
1. Controlli
Prima dell'interpretazione finale dei risultati è necessario verificare i risultati dei
controlli negativo e positivo.
Perché il test sia valido, i risultati dei controlli negativo e positivo devono
essere i seguenti:
* N/A significa “Non Applicabile”. Il software indica N/A per il Ct di un campione quando la curva di
fluorescenza non interseca la soglia.
Se i risultati dei controlli positivo Qs PCR e negativo differiscono da quelli
descritti nella tabella qui sopra, è necessario ripetere la PCR.
2. Campioni
Un campione è considerato positivo per Brettanomyces bruxellensis se
viene ottenuto un valore di Ct ≥ 10 per il fluoroforo FAM.
Se non viene ottenuto alcun valore per il CtFAM (Ct
FAM
= N/A),
l'interpretazione del risultato dipende dal valore del controllo interno:
- Un campione è considerato negativo per Brettanomyces bruxellensis se
non viene ottenuto alcun valore di Ct per il fluoroforo FAM (Ct
FAM
=N/A) e
se il Ct del controllo interno è superiore o uguale a 28. (Ct
HEX
≥ 28).
- Un valore N/A per il Ct
HEX
del controllo interno indica, quando il Ct
FAM
del bersaglio è ugualmente N/A, che probabilmente ha avuto luogo un
fenomeno di inibizione della reazione di PCR. In tal caso, il campione di
DNA deve essere diluito (a 1:10 per esempio) in acqua distillata sterile,
poi sottoposto nuovamente a PCR.
- Se il Ct
HEX
del controllo interno è inferiore a 28 non è possibile
interpretare il risultato. Verificare che la soglia sia stata posta
correttamente o che la curva grezza abbia un aspetto caratteristico di
amplificazione esponenziale. Se la curva osservata non è corretta, sarà
necessario ripetere il test di PCR per questo campione.
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© 2010 Bio-Rad
Rilevazione di Brettanomyces
bruxellensis (FAM)
Rilevazione del controllo
interno (Canale HEX)
Controllo negativo Ct = N/A* 25 ≤ Ct ≤ 40
Controllo positivo Qs PCR 27 ≤ Ct ≤ 37 Non significativo