Bio-Rad VINEO™ Brettanomytest PCR Kit - Manual (Page 37)

El análisis manual permitirá únicamente un análisis cualitativo (presencia o
ausencia).
Para una interpretación automática es necesario utilizar el software Opticon
Monitor™ (versión 3.3 y posteriores) o el software CFX Manager™ Industrial
Diagnostic Edition. Será posible imprimir un informe completo (ver
instrucciones de software).
1. Controles
Antes de la interpretación final de los resultados es necesario verificar los
resultados de los controles positivo y negativo.
Para que la prueba sea válida, los resultados de los controles positivo y
negativo deberán ser los siguientes:
* N/A significa «no aplicable»: el software indica «N/A» para el Ct de una muestra cuando la curva de
fluorescencia no supera el umbral.
Si los resultados de los controles positivos Qs PCR y negativo son distintos
de los descritos en la tabla anterior, es necesario repetir la PCR desde el
principio.
2. Muestras
Una muestra se considera positiva en Brettanomyces bruxellensis si se
obtiene un valor Ct ≥ 10 para el fluoróforo FAM.
Si no se obtiene ningún valor para el Ct
FAM
(Ct
FAM
= N/A), la interpretación
del resultado depende del valor del control interno:
- Una muestra se considera negativa en Brettanomyces bruxellensis si no
se ha obtenido ningún valor de Ct para el fluoróforo FAM (Ct
FAM
=N/A) y el
Ct del control interno es igual o superior a 28 (Ct
HEX
≥ 28).
- Un valor N/A para el Ct
HEX
del control interno indica, cuando el Ct
FAM
del objetivo también es N/A, que probablemente se ha producido un
fenómeno de inhibición de la PCR. En este caso, la muestra de ADN
debe ser diluida (por ejemplo en relación 1:9) en agua destilada estéril y
para luego someterla a una nueva PCR.
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© 2010 Bio-Rad
Detección de Brettanomyces
bruxellensis (FAM)
Detección del control interno
(Canal HEX)
Control negativo Ct = N/A* 25 ≤ Ct ≤ 40
Control positivo Qs PCR 27 ≤ Ct ≤ 37 No significativo