Hoefer TE42 - Manual (Page 29)

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Protein-Transfer-Puffer
Verwenden Sie einen Puffer mit niedriger Ionen-
stärke, wie die beiden unten aufgeführten, um
Überhitzung zu vermeiden. Verwenden des alter-
nativen CAPS-Puffer, wenn Tris nicht verwendet
werden kann, wie in Peptidsequenzierung. CAPS
können Transfer wegen seiner Wirkung auf die
Ladung des Proteins (siehe Matsudaira, 1987)
zu verbessern. Für native Proteine , empfehlen
wir mit dem Elektrophorese-Puffer für die Über-
tragung als auch. Verwenden Sie die Towbin
Puffer SDS-denaturierte Proteine in Richtung der
Anode zu übertragen.
Towbin Puffer
(25 mM Tris, 192 mM Glycin, 20% v/v Methanol,
pH 8,3, 2 Liter)
Tris (FW 121,1) 25 mM 6,0 g
Glycin (FW 75,07) 192 mM 28,8 g
SDS a (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 2,0 g
Man löst in 1,5 Liter destilliertem Wasser. In Methanol als
erforderlich
b . Bringt bis 2 Liter mit destilliertem Wasser.
Verstellen Sie nicht den pH-Wert, der zwischen 8,2 und 8,4
sein sollte. Optional: Chill vor dem Gebrauch.
a Optional: Zugabe von SDS können Transfer Effizienz zu verbessern.
b Abhängig von der Membran-Typ ausgewählt, Zugabe von Methanol
können die Übertragung Ergebnisse zu verbessern (siehe Diskussion
und Tabelle oben). Weil Puffern, die Methanol kann sich verschlech-
tern, wenn über längere Zeit gelagert, fügen Methanol nach Bedarf kurz
vor der Übertragung.
CAPS-Puffer, 1X
(10 mM CAPS, pH 11,0, 5 Liter)
CAPS (FW 221,3) 10 mM 11,1 g
[3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid]
Man löst in 4,5 Liter destilliertem Wasser auf pH 11,0
einstellen mit konz. NaOH. Anpassen der Lautstärke auf
5,0 Liter.