Hoefer TE42 User Manual
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al. für den Transfer von Nukleinsäuren. Buffer-
Systeme für die Übertragung jeder Art von Probe
werden später in diesem Abschnitt aufgeführt.
Faktoren, die die Übertragung
Parameter wie Samplefrequenz Eigenschaften,
Membrantyp, Gel Porengröße und den Transfer-
Puffer verwendet, um all die Übertragbarkeit
der Makromoleküle beitragen und sollte im
Auge behalten werden, wenn die Entwicklung
eines Protokolls. Sehr kleine molekulare Spezies,
zum Beispiel, schnell migrieren, aber oft nicht
wie größere Moleküle binden, große Moleküle
binden effizienter, aber nicht aus dem Gel so
schnell eluieren. Die Elutionsgeschwindigkeit
wird auch durch die Porengröße des Gels und
der Orientierung der Moleküle beeinflusst.
Ferner ist das Ausmaß, in dem die Moleküle
binden an die Membran durch Membraneigen-
schaften wie Porengröße und-typ, und Puffer,
wie pH-, Salz Art und Konzentration, und die
Gegenwart von Detergenzien, wie Natriumdo-
decylsulfat (SDS) beeinflusst. Voraussetzungen
für eine effiziente Elution erforderlich möglicher-
weise nicht mit optimalen Bedingungen für die
Bindung überein. Um die optimalen Bedingungen
für die Übertragung Ihrer Probe zu finden, diese
Effekte auszugleichen: Wenn die Probe Eluti-
onsrate langsam ist, eine längere Übertragung
Zeitraum erforderlich sein. (Nach unserer Erfah-
rung wissen Kleinspannung Transfers für längere
Zeit nicht bieten viel Verbesserung.) Wenn Probe
binden unzureichend ist, versuchen verschiedene
Pufferbedingungen. Für eine umfassende Über-
sicht siehe Gershoni und Palade (1983).
Wenn der Transfer-Puffer-System unterscheidet
sich von dem Elektrophorese-Puffer-System,
sollte das Gel, äquilibriert mit dem Übertra-
gungspuffer vor der Übertragung zu gewährleis-