Hoefer TE42 User Manual
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Problem
Lösung
Diffuse Bandenmuster
Übertragung sofort nach elektrophoretischer Trennung. Wenn Äquilib-
rierung vor der Übertragung, zu verkürzen oder zu beseitigen Gleich-
gewichtszeit oder bewegen Sie das Gel auf den kalten Raum während
der Äquilibrierung.
Wenn Transferpuffer enthält Methanol (≥ 10%), äquilibrieren Sie das
Gel in Transferpuffer für 30 Minuten, damit sie vor der Montage des
Stack schrumpfen. Hinweis: Da Methanol bewirkt, dass das Gel etwas
einlaufen, große Moleküle möglicherweise langsamer zu migrieren.
Achten Sie darauf, dass das Gel fest an der Membran gehalten und
dass es nicht verrutscht einmal Kontakt hergestellt ist.
Wenn eine übermäßige Erwärmung tritt während der Übertragung,
senken die Temperatur der Kühlflüssigkeit im Wärmeaustauscher.
Prüfen, dass die bevorzugte Bindung Oberfläche der Membran (sofern
vorhanden) in Kontakt mit dem Gel.
Ineffiziente Bindung an Membran
Chemische Parameter
Fix oder Vernetzung des Moleküls auf die Membran nach den Anfor-
derungen der Nukleinsäure, ein Protein oder Membrantyp.
Bereiten Protein Transfer-Puffer ohne SDS.
Überprüfen Sie die optimale Menge Methanol für die Membran-Typ
benötigt und überprüfen Sie die Pufferlösung. Zugabe von 10-20%
Methanol zu dem Übertragungspuffer zu verbessern Bindung an
Nitrocellulose.
Membranparameter
Tragen Sie Handschuhe beim Umgang mit Membranen.
Shop Membranen bei Raumtemperatur ohne direkte Sonneneinstrah-
lung zu halten, die Membranen aktiviert.
Verwenden Sie eine Membran mit einer kleineren Porengröße
(0,10 bis 0,20 µm), wenn Proteine durch die Membran passieren,
oder verwenden Sie eine andere Art Membran.
Platz eine Membran sowohl über als auch unter dem Gel wenn der
Verdacht besteht ein Protein in der entgegengesetzten Richtung als
in der Mehrzahl der Proteine . Überprüfen Sie beide Membranen
für Protein(e).
Überprüfen Sie, ob zu viel Probe vorhanden ist für die Bindung
Oberfläche, die durch die Anwendung von zwei Membranen anstelle
von einem. Beim Auftreten von “bis zu blasen”, reduzieren Sie die
Probe Last.
Weitere Hinweise zur Fehlerbehebung, zu beziehen
Bjerrum, O.J. et al. (1988).