Hoefer TE42 - Manual (Page 23)

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Fehlerbehebung
Problem Lösung
Unvollständige Übertragung
Leere Bereiche auf Membran Entfernen Sie alle Lufteinschlüsse im Transfer-Stack Montage:
Montage des Stapels, während es in Transferpuffer getaucht ist,
vorsichtig auf beide Schwamm drücken, wie es auf den Stapel hinzu-
gefügt wird, und rollen eine Glaspipette oder Reagenzglas über der
Membran und Gel zu beseitigen alle Luftblasen.
Reduzieren Sie die Rührgeschwindigkeit, um Turbulenzen zu verhindern.
Prozess nur ein Streifen oder eine Membran in den einzelnen Fächern
oder Kassette zu Überschneidungen zu vermeiden.
Verwenden Sie den Puffer mit einer geringeren Ionenstärke.
Prüfen Elektrode Kontinuität. Während der Übertragung wird ein
steter Strom von Gas entlang der gesamten Länge der Elektroden
freigesetzt. Wenn sich Blasen nicht entlang der gesamten Länge der
Elektrode bilden kann, die Elektrode ersetzen.
Wenn Kassetten gebeugt, wenn sie leer sind, zu ersetzen. Übersprit-
zen die Kassette bewirkt, dass es zu beugen; sehen die empfohlenen
Montageanleitung auf Seite 6.
Gittermuster auf Membran Weitere Blätter Löschpapier auf den Abstand zwischen der Platte und
Kassette des Gels erhöhen. Achten Sie darauf, um die Kassette over-
stuff, sollte das Gel fest und gleichmäßig zwischen den Schwämmen
gehalten werden, aber nicht so dicht, dass sie gequetscht wird.
Moleküle wandern nicht Gel Erhöhen Sie die Feldstärke.
Steigern Transferperiode. (Versuchen Sie, zu verdoppeln.)
Verwenden Sie keine Färbung oder Fixiermittel auf das Gel vor
dem Transfer.
Verwenden Sie eine dünnere Gel.
Reduzieren Sie die Gel-Acrylamid-Konzentration.
Prüfen, dass der pH in der Nähe der pH-Wert bestimmt ist. Die meis-
ten Puffer sollten nicht titriert werden, machen frischem Puffer.
Verwenden 3,5 mM SDS (0,1%) in den Übertragungspuffer.
Vermeiden einschließlich Methanol im Transferpuffer oder reduzieren
Sie die Menge auf das absolute Minimum.
Verwenden Sie analysenreine Reagenzien.
Erhöhen Sie die Länge der Zeit Southern-Blots sind depurinated.
Erhöhung der Nettoladung auf dem Protein durch den Wechsel
zu einer Transfer-Puffer mit einem anderen pH-Wert. Niedrigeren
pH-Wert (<6-7) erhöht die positive Ladung auf Proteine , höheren pH
(>6-7) erhöht die negative Ladung auf Proteine .