Hoefer IEF100 - Manual (Page 27)

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Preparación de las tiras de IPG
Los geles de pH inmovilizados (IPG) son ultra delgadas en geles de
poliacrilamida películas de soporte de plástico. Los geles se hacen con
un gradiente de pH unido covalentemente a la matriz de gel. Los geles
son estables y reproducibles. Los geles se suministran deshidratado y
deben almacenarse a temperaturas de -20 °C o menos.
Las tiras de IPG tienen una ácida (+) final y una base end (–). Imáge-
nes 2D de gel son típicamente se muestra con el lado ácido de la
izquierda, y que es la orientación de las tiras de IPG en la IEF100. El
electrodo adecuado debe ser aplicado a cada extremo: anódico (+) del
electrodo al final ácida (izquierda) y la catódica (–) del electrodo al
final de base (derecha).
Las tiras secas requieren rehidratación antes de la carrera. Típica-
mente, varios reactivos diferentes están incluidos en la solución de
rehidratación para ayudar a solubilizar las proteínas, y permitir con
éxito isoelectroenfoque. La rehidratación se realiza normalmente a
temperatura ambiente, o 20 °C, y necesita un mínimo de 8 horas para
una buena absorción de la solución reswelling. Con frecuencia es más
conveniente para permitir la rehidratación que se produzca durante la
noche. Durante la rehidratación, las tiras IPG están cubiertos en aceite
mineral para evitar la pérdida de humedad, y evitar la cristalización
de urea.
Las tiras IPG se rehidratan con una de las bandejas de rehidratación/
equilibración suministradas con el IEF100. Muestra de proteína se
puede añadir a la tira IPG en este paso. Las tiras IPG se transfieren a
la IEF100 para enfocar.