Leica Biosystems ChromoPlex 1 Dual Detection for BOND - Manual (Page 8)

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Uso previsto
Questo sistema di rilevazione è inteso per un uso diagnostico in vitro.
ChromoPlex
™ 1 Dual Detection è un sistema di anticorpi coniugati alla perossidasi di rafano polimerica (HRP)-linker ed alla fosfatasi
lcalina polimerica (AP)-linker, senza biotina, per la rilevazione di anticorpi primari IgG di topo e di coniglio legati a tessuto. È previsto per
la colorazione di sezioni fissate in formalina, o di tessuto incluso in paraffina con il sistema automatizzato BOND.
L’interpretazione clinica di qualsiasi colorazione o della sua assenza devono essere integrate da studi morfologici. Controlli appropriati
devono essere valutati da un patologo qualificato nel contesto della storia clinica del paziente e di altri test diagnostici.
Il sistema ChromoPlex 1 Dual Detection deve essere usato con le metodiche della buona pratica di laboratorio relative all’uso di controlli
di tessuto. Per sicurezza, i laboratori devono colorare i campioni di ciascun paziente insieme a controlli positivi e negativi ed altri controlli
specifici del tessuto, come ritenuto necessario.
Sommario e spiegazione
Le tecniche immunoistochimiche possono essere usate per dimostrare la presenza di antigeni in tessuti e cellule (vedere “Utilizzo dei
reagenti BOND” nella documentazione di BOND per l’utilizzatore).
ChromoPlex 1 Dual Detection utilizza una nuova tecnologia di polimerizzazione controllata per preparare gli anticorpi coniugati polimerici
HRP-linker e AP-linker. Il sistema di rilevazione evita l’uso di streptavidina e biotina, eliminando quindi colorazioni non specifiche che
risultano dalla biotina endogena.
ChromoPlex 1 Dual Detection funziona nel modo seguente:
Il campione viene incubato con perossido di idrogeno per attenuare l’attività della perossidasi endogena. •
Viene applicato un cocktail di anticorpi primari anti-topo e anti-coniglio fornito dall’utilizzatore. •
Il reagente Poly-HRP IgG localizza gli anticorpi anti-topo. •
Il reagente Poly-AP IgG localizza gli anticorpi anti-coniglio. •
Il primo substrato cromogeno, il 3,3’-Diaminobenzidina tetraidrocloruro (DAB), visualizza gli anticorpi anti-topo per mezzo di un •
precipitato marrone.
Il secondo substrato cromogeno (Fast Red), visualizza gli anticorpi anti-coniglio mediante un precipitato rosso.
•
La colorazione di contrasto con ematossilina (blu) permette di visualizzare il nucleo delle cellule. •
L’utilizzo di ChromoPlex 1 Dual Detection in combinazione con il sistema automatizzato BOND riduce la possibilità di errore umano e la
variabilità intrinseca risultante dalla diluizione individuale del reagente, dalla pipettatura manuale e dall’applicazione del reagente.
Reagenti forniti
I reagenti forniti sono sufficienti per 25 corse individuali di colorazione con BOND o per un massimo di 100 vetrini.
Per ottenere un massimo di 100 vetrini da questo sistema di rilevazione, i vetrini devono essere raggruppati in gruppi di 4 o superiori,
nell’assemblaggio di colorazione dei vetrini. Il raggruppamento in quantità inferiori a 4 porterà alla colorazione di un numero inferiore di
vetrini.
Peroxide Block (15 mL) 3-4% perossido di idrogeno. 1.
Polymer mHRP (15 mL) anti-topo Poly-HRP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,09% 2.
ProClin ™ 950.
Polymer rAP (15 mL) anti-coniglio Poly-AP contenente il 10% (v/v) di siero animale in soluzione salina tamponata con Tris e 0,09% 3.
ProClin 950.
DAB Part 1 (2 mL) 66 mM 3,3’-Diaminobenzidina tetraidrocloruro in una soluzione stabilizzante.
4.
DAB Part B (35 mL) ≤0,1% (v/v) perossido di idrogeno in una soluzione stabilizzante. 5.
Red Part A (5,5 mL) Catalizzatore contenente 0,5% ProClin 950. 6.
Red Part B (1,0 mL) Substrato. 7.
Red Part C (1,0 mL) Substrato. 8.
Red Part D (35 mL) Soluzione tampone contenente 0,5% ProClin 950. 9.
Hematoxylin DS9477 (15 mL) <0,1% Ematossilina. 10.
Diluizione e miscelazione
ChromoPlex 1 Dual Detection è ottimizzato per l’utilizzo con il sistema BOND.
La ricostituzione, la miscelazione, la diluizione o la titolazione di questi reagenti non è richiesta.
Materiali richiesti ma non forniti
Mezzi di supporto compatibili con il ChromoPlex 1 Dual Detection (vedere Precauzioni).
Fare riferimento a “Utilizzo dei reagenti BOND” nella documentazione di BOND per l’utilizzatore per un elenco completo di materiali
richiesti per il trattamento del campione e della colorazione immunoistochimica con il sistema BOND.
ChromoPlex ™ 1 Dual Detection for BOND
N. catalogo: DS9477