Hoefer SE400 - Manual (Page 40)

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6. La resolución de gel de superposición
(0,375 M TrisCl, 0,1% SDS, pH 8,8, 100 ml)
1,5 M Tris-Cl, pH 8,8 (Solución #2) 0,375 M 25,0 ml
10% SDS (Solución #4)
3,5 mm 1,0 ml
H
2
O desionizada a 100,0 ml
Almacena hasta 3 meses a 4 °C en la oscuridad.
-o-
El agua saturada de n-butanol
Agitar n-butanol y desionizada H2O en un embudo de
separación. Retire la acuosa (inferior) de fase. Repita
este procedimiento varias veces. Utilice la fase supe-
rior.
-o-
Si una superposición interfiere con el protocolo
preferido, aislar el gel a partir del oxígeno atmosférico
mediante la colocación de un peine preparativa o gel
de resolución anterior en el gel.
7. Ejemplo 2X tampón tratamiento
(0,125 M TrisCl, 4% SDS, 20% glicerol,
0,2 mM DTT*, pH 6,8, 10 ml)
0,5 M Tris Cl, pH 6,8 (Solución #3) 0,125 M 2,5 ml
10% SDS, 0,35 M (Solución #4)
0,14 M 4,0 ml
Glicerol (FW 92,09) 20% v/v 2,0 ml
Dithiothreitol (DTT) (FW 154,2) 0,2 mM 0,31 g
Azul de bromofenol (FW 691,9) 0,3 mM 2,0 mg
H
2
O desionizada a 10,0 ml
* o 2-mercaptoethanol (FW 78,13) 2% v/v 0,2 ml
Dividir en partes alícuotas de 1,0 ml y se almacena a -40 °C
a -80 °C durante un máximo de 6 meses.
-o-
Ejemplo 6X tampón tratamiento
(0,35 M TrisCl, 10% SDS, 30% glicerol, 9,3% DTT,
pH 6,8, ~10 ml)
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Solución #3) 0,35 M 7,0 ml
SDS (FW 288,4) 0,35 M 1,0 g
Glicerol (FW 92,09) 30% v/v 3,0 ml
DTT (FW 154,2) 0,6 M 0,93 g
Azul de bromofenol (FW 691,9) 0,175 mm 1,2 mg
Dividir en partes alícuotas de 1,0 ml y se almacena a -70 °C.