Hoefer SE400 - Manual (Page 38)

•
p30
Apéndice A. Sistema de Laemmli geles
Tabla 4. Laemmli geles - concentraciones finales
gel de gel de electroforesis
resolución apilamiento en tampón
Acrilamida conc. 10% T*, 2,6% C 4% T, 2,6% C
Tris-Cl 0,375 M 0,125 M
Tris-Glycine 0,025 M Tris base
0,192 M glycine
pH 8,8 6,8 ~8,3
SDS 0,1% 0,1% 0,1%
APS † 0,05% w/v 0,05 – 0,1% w/v
TEMED ‡ 0,05% v/v 0,05 – 0,1% v/v
* Para lograr cualquier otra concentración final deseada, ajustar el
volumen de acciones de acrilamida y el agua. Los volúmenes para
diferentes concentraciones se muestran en la Tabla 5.
† Persulfato de amonio.
‡ Tetrametiletilendiamina
El sistema de Laemmli es el protocolo más común
para electroforesis SDS-desnaturalizadas proteínas. El
ion principal en este sistema de tampón discontinuo
es el cloruro y el ion final es la glicina. En conse-
cuencia, el gel de resolución y el gel de apilamiento
contener tampones Tris-Cl (de diferente concentración
y pH), y el tampón de electroforesis contiene Tris-
glicina. Todos los tampones contienen 0,1% de SDS.
La composición en gel de poliacrilamida se indica
mediante dos diferentes porcentajes:
El porcentaje total de acrilamida (% T) en el gel de
resolución, que puede variar de 4 a 20%, determina
el tamaño del poro. Comúnmente, la cantidad de
reticulante utilizado (% de C) es de 2,6%. En el
ejemplo siguiente sistema, la composición gel de
resolución es de 10% T, 2,6% de C, que da como
resultado un tamaño de poro medio. La composición
de gel de apilamiento es 4% T, 2,6% C La T% en el
gel de apilamiento es menor debido a un tamaño de
poro grande se requiere.
¡Atención! La acrilamida es
una neurotoxina. Siempre
use guantes al manipular en
cualquier forma y usar una
máscara cuando se pesa el
polvo. Nunca pipetear la boca
de la solución.
g(bisacrylamide)
g(acrylamide + bisacrylamide)
%C = × 100
g(acrylamide + bisacrylamide)
100 ml
%T = × 100