Hoefer SE300 miniVE - Manual (Page 33)

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Problem Lösung
Ineffiziente Verbindlich
Chemische Parameter
• Fix oder Vernetzen der Mol an die Anforderungen
der Nukleinsäure, ein Protein oder Membrantyp.
• Bereiten Protein Transfer-Puffer ohne SDS. SDS
verbessern können Transfereffizienz, reduziert
jedoch unverbindlich.
• Überprüfen Sie die optimale Menge Methanol für
die Membran-Typ benötigt und überprüfen Sie die
Pufferlösung. Zugabe von 10-20% Methanol zu
dem Übertragungspuffer zu verbessern Bindung an
Nitrocellulose.
Membran Parameter • Tragen Sie Handschuhe beim Umgang mit Membranen.
• Bewahren Membranen richtig. Schützen Sie
sie vor extremen Temperaturen und direkte
Sonneneinstrahlung.
• Wenn Proteine durch die ausgewählte Membran
passieren, versuchen Sie eine andere Art oder eines
mit kleinerer Porengröße (0,10 bis 0,20 µm).
• Wenn verschiedene Proteine können in entgegeng-
esetzte Richtungen wandern, stellen eine Membran
auf beiden Seiten des Gels.
• Wenn die Probe Last möglicherweise überschritten
die Fähigkeit der Bindung Oberfläche, müssen zwei
Membranen. Beim Auftreten von “bis zu blasen”,
reduzieren Sie die Probe Last.
Diffuse Bandenmuster • Führen Sie die Elektrotransfer unmittelbar nach
elektrophoretischer Trennung.
• Kürzen oder zu beseitigen, bevor Äquilibrierungss-
chritt Elektrotransfer, oder das Verhalten des Glei-
chgewichts im Kühlraum.
• Wenn der Transfer-Puffer enthält Methanol (≥10%),
äquilibriert das Gel für 30 Minuten, damit sie
in vollem Umfang zu schrumpfen. Hinweis: Gel
Schrumpfen kann die Migration von großen
Molekülen aus dem Gel zu verlangsamen.
• Achten Sie darauf, dass das Gel nicht verschiebt,
sobald sie in Kontakt mit der Membran.
• Überprüfen Sie, dass jede Bindung bevorzugte
Oberfläche der Membran das Gel zeigt.