Hoefer SE300 miniVE - Manual (Page 32)

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Blotter Fehlerbehebung
Problem Lösung
Unvollständige Übertragung
Leere Bereiche auf der Membran • Entfernen Sie alle Luftblasen in den Transfer-Stack,
nehmen besonders große Sorgfalt bei der Montage auf
Stapel die Bildung von Luftblasen, wie jede Schicht
platziert zu verhindern.
• Überprüfen Elektrode Kontinuität.
• Verwenden Sie eine niedrigere Ionenstärke Puffer.
Moleküle wandern nicht aus Gel • Erhöhen Sie die Feldstärke.
• Erhöhen Sie die Transferperiode. (Versuchen Sie,
zu verdoppeln.)
• Setzen Sie das Gel gegen Fleckenbildung oder
Fixiermittel vor der Übertragung.
• Verwenden Sie eine dünnere Gel.
• Reduzieren Sie die Gel-Acrylamid-Konzentration.
• Für Proteine , mit 3,5 mM SDS (0,1%) in den
Übertragungspuffer.
• Verringern Sie die Methanol in der Protein-Transfer-
Puffer oder reduzieren Sie die Menge auf ein
Minimum. In der Regel 10% Methanol ist für gute
Bindung an Nitrozellulose-Membranen benötigt.
• Erhöhen Sie die Länge der Zeit DNA-Blots werden
depurinated.
• Überprüfen Sie den pH. Die meisten Puffer sollten
nicht titriert werden, machen frischem Puffer.
• Für nativen Gelen, erhöhen die Nettoladung des
Proteins durch den Wechsel zu einer Transfer-Puffer
mit einem anderen pH-Wert. Niedrigeren pH-Wert
(<6-7) erhöht die positive Ladung auf Proteine ,
höheren pH (>6-7) erhöht die negative Ladung auf
Proteine .