Hoefer SE300 miniVE - Manual (Page 28)

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Bereiten Sie die Transfer-Stack
Überführen Sie die Probe so schnell wie möglich
nach der Elektrophorese zu Probe Diffusion
innerhalb des Gels zu minimieren. Elektrophore-
tischen Transfer auf nicht weniger als vier Mini-
gel zu einer Zeit durchgeführt werden, wenn
zwei Gelen in jeder von zwei Modulen angeord-
net sind.
Die Übertragung Stapel besteht aus dem Gel und
der Membran, Filterpapier, und drei Verpackung
Schwämme. Das Gel bestimmt die Größe der
Membran und Filterpapier.

Für jedes Gel, schneiden die Membran und zwei
Stück Filterpapier die gleiche Größe wie das Gel, aber
nicht größer als 8,5 × 10,5 cm.

Äquilibrieren des Gels in Transferpuffer für
10 Minuten.
Äquilibrierung kann das Gel zu quellen oder bevor
es in Kontakt mit der Transfermembran schrumpfen
und entfernt überschüssiges Puffersalze und
Reinigungsmittel aus dem Gel. Längere Äquilibrierung
kann in diffusen Banden führen.

Vornässen Nitrocellulose oder Nylon-Membranen
in destilliertem Wasser, dabei nicht zu fangen
Luftblasen.
Tauchen einem Ende der Membran in den Puffer
und langsam getaucht werden, so dass sie durch
Kapillarwirkung zu benetzen.
Vornässen PVDF oder andere hydrophobe Membranen
in Methanol.
Nach dem Vornässen, tränken alle Arten Membran in
Transferpuffer für 2-5 Minuten.

Befeuchten Sie die zwei Stücke Filterpapier in
Transferpuffer.
Wichtig! Versuchen Sie, das
Gel richtig zum ersten Mal
statt. Proteine können sofort
anfangen, zu übertragen. Nach
Übertragung beginnt, bewegt
sich das Gel werden die
Ergebnisse verfälschen oder
zu “fliegenden Schatten” auf
dem Blot.