Hoefer HB1000 - Manual (Page 22)

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Los protocolos experimentales
Existen diferentes protocolos disponibles en la
web, en revistas y en libros de texto. Hacemos
referencia a varios al final de esta sección.
1. Concentración de especies
Objetivo: La cantidad ideal de molécula diana depende
de la complejidad del ácido nucleico diana. El ADN
amplificado, por ejemplo, puede haber sido expresada
en cantidades grandes o pequeñas. Por lo tanto, el
truco es comenzar con objetivo suficiente (~25 g) y
determinar una cantidad ideal de forma experimental.
Sonda: Plan para tener más sonda de meta espe-
rada. Para determinar esto, realizar un experimento
de extinción: en serie aumentar la cantidad de diana
por 2-veces contra una cantidad fija de sonda. Hibri-
dar durante un período corto de tiempo y cuantificar
la cantidad de sonda que se ha hibridado. Mien-
tras aumenta la señal y muestra una linealidad hay
presente exceso de sonda (Fig. 6 a la izquierda). Si los
niveles de señal de apagado, después la sonda no está
presente en exceso (Fig. 6 a la derecha).
Fig 6. Análisis para el exceso
de sonda en reacciones de
hibridación.
Cantidad de ácido
nucleico diana (unidades
arbitrarias) Cantidad de ácido
nucleico diana (unidades
arbitrarias)
Sonda
hibridada
(%)
Sonda
hibridada
(%)