Hoefer SUB Series - Manual (Page 27)

•
p19
en gel de agarosa. Para fragmentos más pequeños de
0,1 kb, geles de poliacrilamida son más adecuadas.
ARN Movilidad
Ya sea antes o durante la electroforesis, el ARN debe
ser desnaturalizado. Por ejemplo,
• Fragmentos de ARN que tienen desnaturalizado con
sulfóxido de dimetilo glioxal y se pueden separar en
geles de agarosa neutros, o
• ARN puede ser fraccionada en geles de agarosa
que contienen hidróxido de metilmercurio o
formaldehído.
RNA de muestras por lo general requieren carreras
largas o tampones que se consumen fácilmente, por
lo que es necesario para hacer circular el tampón.
Análisis del Norte, no se debe ejecutar en un tanque
de mini gel.
Separación de rendimiento
Gel de concentración, corriendo tampón, tensión,
temperatura, conformación, y la presencia de bromuro
de etidio todo afectar los resultados de separación.
Gel de Selección de la concentración
La gama de tamaños de los fragmentos que ser
separados determinará la elección de la concentración
de agarosa para un gel. Típica concentración de
agarosa es 0,5% a 3,0%. Para grandes fragmentos
de ADN de bajo porcentaje geles son necesarios,
mientras que para pequeños fragmentos de ADN,
de alto porcentaje geles son recomendables. Geles
débiles (<0,5% de agarosa) se debe a electroforesis
a bajas temperaturas (por ejemplo ~4 °C). Geles de
agarosa de 0,75% a 1,0%, para la electroforesis de
rutina, se recomiendan para una amplia gama de
separaciones (0,15 a 15 kb). 2-4% geles de agarosa
se seleccionan generalmente para la resolución de
fragmento de PCR.
Si el gel tiene que ser posteriormente fotografiado,
geles delgadas (2-3 mm) con agarosa de bajo
porcentaje son mejores que los geles de espesor o
de alto porcentaje. Este último producir opacidad
aumentada y autofluorescencia.