Hoefer HB1000 - Manual (Page 27)

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Procédure
1. Ajouter 15 ml de la solution de pré-hybridation
pour chaque bouteille d’hybridation contenant
la tache. Retirer les bulles entre le verre et Blot.
Boucher les flacons, les bouteilles à fixer les roues
du carrousel porte-bouteille, et fermer la porte du
four d’hybridation.
2. Incuber le transfert à 42 °C pendant 1 heure.
3. Éliminer la solution de pré-hybridation et les
remplacer par 10 mL de solution d’hybridation.
4. Si vous utilisez des sondes radiomarquées travailler
en toute sécurité de l’autre côté d’un bouclier
bêta-bloquant. Pipeter 1 × 10
6 coups par minute
de sonde radiomarquée, ou 200 ng de sonde bioti-
nylée, dans un tube en plastique de 15 ml. Sceller
le tube avec un bouchon en plastique et percer un
trou dans le dessus avec une aiguille de seringue
pour éviter l’accumulation de pression lors de
l’ébullition.
5. Dénaturer la sonde en plaçant des échantillons
dans le bain d’eau bouillante et le chauffage
pendant 10 minutes. Transférer immédiatement
le tube de la glace pendant 5 minutes (pour
empêcher la renaturation). Ajouter 5 mL de
tampon d’hybridation à la sonde et le transfert à la
bouteille d’hybridation contenant la tache. Évitez
de verser la sonde directement sur la tache.
6. Incuber dans le four à hybridation Hoefer HB1000
pendant 6 à 8 heures à 42 à 56 °C.
Laver la tache
• Tupperware récipient (dim. pour contenir la tache)
• 0,1X SSC, 0,1% SDS (préchauffée à 50 °C)
• SSC 2X, SDS 0,1% (à température ambiante)
• 2X SSC (température ambiante)
• 0,15X SSC, 0,1% SDS (pré-chauffé à 50 °C)
• Gants
• Papier filtre
• Carton
• La pellicule de plastique
• Ruban
Pour sondes radioactives, vous aurez également besoin:
• Support de film X-ray
• Film radiographique
• Intensifier l’écran