Hoefer HB1000 - Manual (Page 26)

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Protokoll
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Hybridisierung mit Nylon-oder Nitrocellulose
Hybridisierung der Sonde an Nukleinsäure, die zuvor
auf Nylon oder Nitrozellulose-Membranen transferiert
gezielt durch Zugabe von einzelsträngigen Sonde
auf die Membranen, das zuerst mit Vorhybridisier-
ungslösung wurden inkubiert bewerkstelligt. Sowohl
die Prähybridisierung und Hybridisierung Lösungen
enthalten Puffern zur zufälligen Bindung der Sonde
an die Filter zu verhindern.
Reagenzien und Ausrüstung
• Prähybridisierung/Hybridisierungslösung
[45% Formamid, 5X SSPE (0,9 M NaCl, 50
mM Natriumphosphatpuffer, pH 7,4, 5 mM
EDTA), 0,1% SDS, 5X Denhardt-Lösung (0,1%
jeweils Ficoll, Polyvinylpyrrolidon und bovinen
Serum Albumin), und 100 mg/mL denaturierte
Lachssperma-DNA]. Gut mischen und zu entfernen
Aggregate vor dem Gebrauch.
• Hoefer Hybridisierung Flasche (n) und Kappen
• 15 mL Plastikröhrchen
• Kochendes Wasserbad
• Eimer mit Eis
• Handschuhe
• Beta Blockierung Schild
• Hoefer HB1000 Hybridisierungsofen
Hinweis: Bei der Vorbereitung
Prähybridisierung/
Hybridisierungslösungen, fügen
Trockenreagenzien direkt an
den Formamid/SSC-Lösung.
Inkubieren unter Mischen bei
40-50 °C für 2 Stunden oder
bis zur Auflösung. Lagerung
bei -20 °C. SDS wird bei
Raumtemperatur auszufällen,
sondern bleiben in Lösung bei
37 °C.