Hoefer TE42 - Manual (Page 29)

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Tampones proteína de transferencia de
Utilizar un tampón con baja fuerza iónica, tal
como los dos se enumeran a continuación, para
evitar el sobrecalentamiento. Utilizar el tampón
CAPS alternativa cuando Tris no se puede utili-
zar, como en la secuenciación de péptidos. CAPS
puede mejorar la transferencia debido a su efecto
sobre la carga de la proteína (ver Matsudaira,
1987). Para las proteínas nativas, le sugerimos
utilizar el tampón de electroforesis para la trans-
ferencia también. Utilizar el tampón de Towbin
para transferir SDS-desnaturalizadas proteínas
hacia el ánodo.
Towbin tampón
(25 mM Tris, 192 mM glicina, 20% v/v de metanol,
pH 8,3, 2 litros)
Tris (FW 121,1) 25 mM 6,0 g
Glycina (FW 75,07) 192 mM 28,8 g
SDS a (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 2,0 g
Disolver en 1,5 litros de agua destilada. Añadir metanol según
sea necesario
b . Llevar a 2 litros con agua destilada. No ajustar
el pH, el cual debe estar entre 8,2 y 8,4.
Opcional: Chill antes de su uso.
a Opcional: agregar SDS puede mejorar la eficiencia de transferencia.
b Dependiendo del tipo de membrana seleccionada, añadiendo metanol
puede mejorar los resultados de transferencia (véase la discusión y
la tabla anterior). Debido a tampones que contengan metanol puede
deteriorarse si se almacena por largos períodos, con metanol como se
requiere antes de transferir.
CAPS tampón, 1X
(CAPS 10 mM, pH 11,0, 5 litros)
CAPS (FW 221,3) 10 mM 11,1 g
[3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid]
Disolver en 4,5 litros de agua destilada, ajustar el pH a 11,0
con HCl conc. NaOH. Ajustar el volumen a 5,0 litros.