Hoefer SE300 miniVE - Manual (Page 33)

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problema solución
Ineficiente vinculante
Los parámetros químicos
• Fijar o reticular el topo a los requisitos del ácido
nucleico, el tipo de proteína, o de la membrana.
• Preparar buffer de proteína de transferencia sin SDS.
SDS puede mejorar la eficiencia de transferencia,
pero reduce la unión.
• Verificar la cantidad óptima de metanol necesario
para el tipo de membrana y comprobar la solución
tampón. Añadir 10-20% de metanol para el tampón
de transferencia para mejorar la unión a nitrocelulosa.
Parámetros de membrana • Use guantes para manipular las membranas.
• Almacenar membranas correctamente. Protegerlos
de las temperaturas extremas y luz solar directa.
• Si las proteínas pasan a través de la membrana
seleccionada, trate de un tipo diferente o una con
un tamaño de poro más pequeño (0,10-0,20 µm).
• Si las proteínas diferentes pueden migrar en
direcciones opuestas, colocar una membrana en
ambos lados del gel.
• Si la carga de la muestra puede ser superior a la
capacidad de la superficie de unión, se aplican dos
membranas. Si “soplar a través de” ocurre, reducir
la carga de la muestra.
Patrones difusos de la bandas • Llevar a cabo la electrotransferencia inmediatamente
después de la separación electroforética.
• Reducir o eliminar el paso de equilibrio antes de
electrotransferencia, o el equilibrio conducta en el
cuarto frío.
• Si el tampón de transferencia contiene metanol
(≥10%), equilibrar el gel durante 30 minutos para
permitir que se contraiga completamente. Nota:
Gel de contracción puede retardar la migración de
moléculas de gran tamaño del gel.
• Tenga cuidado de que el gel no se desplaza, una
vez entra en contacto con la membrana.
• Compruebe que cualquier superficie preferida de
unión de la membrana se enfrenta el gel.