Hoefer TE70X - Manual (Page 25)

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5. Electrotransferencia notas
• Ejecute el traslado tan pronto como sea
posible después de la electroforesis para mini-
mizar la difusión de proteínas en el gel.
• Geles apilados deben ser todos del
mismo tamaño.
• Limitar las transferencias a dos horas o menos.
• La concentración de metanol recomendado
para diferentes tipos de membrana son:
membrana tipo % de metanol
Acusado de nylon 0
Nitrocelulosa 10 – 20
PVDF 10 – 20
• Utilizar un tampón con baja fuerza iónica
como uno de los dos se enumeran a conti-
nuación para evitar el sobrecalentamiento.
Utilizar el tampón CAPS cuando Tris no puede
ser utilizado (por ejemplo, la secuenciación
de péptidos). CAPS puede mejorar la transfe-
rencia debido a su efecto sobre la carga de la
proteína (ver Matsudaira, 1987).
Towbin tampón
(25 mM Tris, 192 mM glycina, 20% v/v metanol,
pH 8,3, 1 litro)
Tris (FW 121,1)
25 mM 3,0 g
Glycina (FW 75,07) 192 mM 14,4 g
SDS* (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 1,0 g
Disolver en 600 ml de agua destilada.
Añadir metanol como requerida
† .
Llevar a 1 litro con agua destilada. No ajustar el pH,
el cual debe estar entre 8,2-8,4.
Opcional: Chill antes de su uso.
*Opcional: agregar SDS puede mejorar la eficiencia de transferencia.
†
Dependiendo del tipo de membrana seleccionado (ver tabla arriba), la
adición de metanol puede mejorar los resultados de transferencia.
Nota: tampones que contengan
metanol puede deteriorarse si
se almacena por largos períodos
con metanol, justo antes de
la transferencia.